凋亡試劑盒（綠色熒光）

凋亡試劑盒（綠色熒光）

說(shuō)明

一般描述

廣泛使用的方法用于確定凋亡，包括基于瓊脂糖凝膠電泳的基因組DNA分析以及基于3H-胸苷或5-溴-2′-脫氧-尿苷的DNA片段檢測(cè)。該方法包含在特定的細(xì)胞群中將片段化的低分子量DNA與未片段化的高分子量DNA進(jìn)行分離。因此，這些方法并不提供關(guān)于在特定細(xì)胞群或特別是組織切片中某個(gè)獨(dú)立細(xì)胞命運(yùn)的信息?；蛘?，獨(dú)立的凋亡細(xì)胞可能因其特征性的核染色質(zhì)堆疊和片段而可通過(guò)顯微鏡進(jìn)行識(shí)別，但這種方法具有主觀性并受限于形態(tài)發(fā)生最大變化這一相對(duì)窄的時(shí)間窗口。

凋亡的標(biāo)志是DNA的降解，而這在早期是對(duì)核小體間DNA連接體區(qū)域是有選擇性的。DNA的切割可能會(huì)產(chǎn)生雙鏈和單鏈的DNA斷裂（切口）。兩種類(lèi)型的斷裂都可在酶促反應(yīng)中利用修飾的核苷酸（如生/物/素-dUTP、DIG-dUTP、熒光素-dUTP）的游離3′-OH端標(biāo)記而被檢測(cè)到。這些酶末端轉(zhuǎn)脫氧核苷酰酶（TdT）可催化脫氧核糖核苷酸的模板非依賴性聚合至單鏈及雙鏈DNA的 3′-末端。這種方法也被稱(chēng)之為T(mén)UNEL(TdT-介導(dǎo)的 dUTP-X 缺口 末端標(biāo)記)?；蛘?，游離的3′-OH基團(tuán)可能通過(guò)一種稱(chēng)為切口翻譯的模板依賴機(jī)制而利用DNA聚合酶被標(biāo)記。然而，TUNEL法被視為更為敏感且快速的。

試劑盒用于在單細(xì)胞水平對(duì)凋亡進(jìn)行檢測(cè)和定量，基于對(duì)DNA鏈斷裂的標(biāo)記（TUNEL技術(shù)）；通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。

特異性

TUNEL反應(yīng)傾向于對(duì)在凋亡過(guò)程中產(chǎn)生的DNA鏈斷裂進(jìn)行標(biāo)記。這能夠?qū)⒌蛲雠c壞死以及由細(xì)胞增殖抑制藥物或放射誘導(dǎo)的主要DNA鏈斷裂進(jìn)行區(qū)分。

應(yīng)用

該原位細(xì)胞死亡檢測(cè)試劑盒，熒光素法是一種精準(zhǔn)、快速并簡(jiǎn)便的非放射性技術(shù)用于在細(xì)胞和組織中利用流式細(xì)胞儀通過(guò)熒光顯微鏡和定量檢測(cè)在單細(xì)胞水平對(duì)凋亡的細(xì)胞死亡進(jìn)行檢測(cè)和定量。[1][2]因此，該原位細(xì)胞死亡檢測(cè)試劑盒可用于多種不同的檢測(cè)系統(tǒng)。

舉例包括：

在基礎(chǔ)研究中對(duì)冷凍及福爾馬林固定組織切片中獨(dú)立的凋亡細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)[3][4][5]

在癌癥研究中對(duì)惡性細(xì)胞對(duì)藥物誘導(dǎo)凋亡的敏感性進(jìn)行測(cè)定[6]

通過(guò)雙染過(guò)程對(duì)異質(zhì)性細(xì)胞群中正在經(jīng)歷細(xì)胞死亡的細(xì)胞進(jìn)行分析[7]

特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)

靈敏：使用熒光素-dUTP進(jìn)行的直接標(biāo)記過(guò)程可降低背景標(biāo)記

快速：熒光素-dUTP的使用使得能夠在TUNEL反應(yīng)后直接對(duì)樣本進(jìn)行分析

便捷：無(wú)需二級(jí)檢測(cè)系統(tǒng)

準(zhǔn)確：在分子水平（DNA鏈斷裂）進(jìn)行凋亡識(shí)別并對(duì)處在凋亡極早期的細(xì)胞進(jìn)行識(shí)別

包裝

1個(gè)試劑盒包含2種組分。

制備說(shuō)明

工作溶液：將全部體積（50 μl）的酶溶液加入至剩下的450 μl標(biāo)記溶液以獲得500 μl TUNEL反應(yīng)混合物。

充分混合以平衡組分。