亚洲无码在线播放,水蜜桃av无码,国产欧美一区二区精品性色 ,日日天干夜夜狠狠爱

產(chǎn)品分類
您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 固體樣本處理方法
固體樣本處理方法
  • 發(fā)布日期:2024-07-04      瀏覽次數(shù):412
    • 固體樣本處理方法:
              固體樣本處理原則:稱取1g的固體樣本,用9g的合適緩沖液溶解,分泌蛋白可以直接離心取上清檢測,細(xì)胞內(nèi)的蛋白,要先收集細(xì)胞,再用合適方法破碎,離心取上清測試。


      1、組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。對于植物組織,不好勻漿的話,就用液氮研磨,將植物組織放在研缽中,加入適量液氮,充分研磨。

      2、細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本:
      許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白,這個(gè)時(shí)候,要先收集細(xì)胞,洗滌干凈,再破碎細(xì)胞,離心取上清。
      (1)培養(yǎng)的細(xì)胞
      A、動物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融(如果反復(fù)凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
      B、植物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設(shè)置破碎2s,冷卻30s的方式,充分破碎細(xì)胞,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
      (2)組織的細(xì)胞
      切割標(biāo)本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細(xì)胞三遍。再用上述的細(xì)胞破碎方法破碎細(xì)胞。

      3、土壤:稱取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工將標(biāo)本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細(xì)胞內(nèi)蛋白,要破碎細(xì)胞。

      4、咽拭子:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細(xì)胞內(nèi)蛋白,要破碎細(xì)胞。

      5. 植物標(biāo)本的采集及保存
      1、 稱取0.1g(誤差±3%以內(nèi))新鮮植物組織樣本,在液氮中充分研磨;
      2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度過夜;
      3、 于4度,8000rpm,離心1小時(shí),取上清;
      4、 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%乙m(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環(huán)。過柱后的樣本真空干燥或氮?dú)獯蹈?,保存?zhèn)溆茫?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px;"/>5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)?;靹蚝笫覝胤胖?0分鐘,然后4度離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時(shí)保存于4度待用。


      樣本收集注意事項(xiàng)
      1、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
      2、標(biāo)本采集后盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
      3、我們羅列的是通用的樣本處理方法,無法涵蓋各種樣本,對于一些特殊樣本,建議實(shí)驗(yàn)人員多參考已發(fā)表的文獻(xiàn),自行設(shè)計(jì)合理的樣本處理方法。


    快被强欲学长C晕了男男小说| 啊灬啊灬啊灬快喷水了视频| 性调教室高h学校小说| 久久国产精品波多野结衣av| 男男吹潮视频chinese| 欧美成人无码大尺度电影苦月亮| 9 1免费版下载安装| 黑人巨大精品欧美黑寡妇AV免费| 性做久久久久久免费观看| 香港特级三a毛片免费观看| 麻豆乱码国产一区二区三区 | 国产精品久久毛片| 老色69久久九九精品高潮| 少妇高潮喷水久久久久久久久 | 荫蒂添的喷水a片视频| 丰满少妇大力进入av亚洲| 毛片24种姿势无遮无拦| 丰满的已婚女人HD中字| 高大丰满肥熟妇丰满大白屁股| 黑帮大佬和我的365天| 国产又粗又猛又大爽又黄| 女士全透毛三角透明内裤| 免费国产黄网站在线观看动图| 好爽…又高潮了毛片喷水| 新版天堂资源中文8在线| 欧洲多毛BBBBXXXX| 为啥男人一吃奶女人就流水| 综影视之被各种男人啪h| 2023极品少妇XXXO露脸| 中文字幕乱码无码人妻系列蜜桃| 国产精品久久久久久久9999| 精品黑人一区二区三区| 老司机福利导航| 女性湿锐疣初期图片| 国产日韩av在线播放| 两片肥厚乌黑的陰唇| 疯狂做爰18分钟视频| 免费无码成人AV在线播| 哦┅┅快┅┅用力啊┅警花少妇| 人人妻人人澡人人爽人人精品浪潮| 欧美xxxx黑人又粗又长精品|