亚洲无码在线播放,水蜜桃av无码,国产欧美一区二区精品性色 ,日日天干夜夜狠狠爱

產(chǎn)品分類
您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 細胞轉(zhuǎn)染的方法及常用步驟
細胞轉(zhuǎn)染的方法及常用步驟
  • 發(fā)布日期:2021-08-23      瀏覽次數(shù):2910
    • 一、方法
      1、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法
      陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過靜電作用,將DNA分子包裹入內(nèi),形成DNA脂復合物,也能被表面帶負電的細胞膜吸附,再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,是目前實驗室方便的轉(zhuǎn)染方法之一,其轉(zhuǎn)染率較高,優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性,所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時。常用細胞類型:cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。

      2、電穿孔轉(zhuǎn)染法
      電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內(nèi),這種方法就是電穿孔。當遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染。一般情況下,高電場強度會殺死50%-70% 的細胞?,F(xiàn)在針對細胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護劑,可以大大的降低細胞的死亡率,同時提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率。

      3、病毒感染
      對于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與電穿孔轉(zhuǎn)染都無法成功轉(zhuǎn)染的細胞系建議用病毒感染,此法可以快速100%感染,檢測成功率高。

      二、常用步驟
      1. 轉(zhuǎn)染試劑的準備
      ① 將400ul去核酸酶水加入管中,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物。
      ② 震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存,使用前還需震蕩。
      2. 選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質(zhì)體  體積:DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,再次震蕩。
      3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。
      4. 吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。
      5. 加入混合液,將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。
      6. 到時后,根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液,之后加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時。

    无码人妻丰满熟妇啪啪欧美| 欧美熟妇呻吟猛交XX性| 中文字幕日本人妻久久久免费| jzzijzzij亚洲成熟少妇| 亚洲av无码日韩av无码网站冲| 天堂网在线.www天堂在线资源| 人妻丰满熟妇AV无码区不卡| 九色腾只为高清而生| 国产精品扒开腿做爽爽爽 | 日韩精品一区二区三区四区蜜桃| 在线观看免费a∨网站| 再深点灬舒服灬太大了霍水| 在电梯伦流澡到高潮H男男| 女邻居的大乳中文字幕BD| 黑人荫道BBWBBB大荫道| 久久久久久久人妻无码中文字幕爆| 热热色| 美国色情巜肉欲横流| 欧美老妇交乱视频| 久久亚洲国产精品五月天婷| 被绑在机器上榨精失禁男男 | 精品乱码一区二区三四区视频| 又粗又硬又黄a级毛片| 中文字幕人妻无码专区| 免费a级毛片无码a∨免费软件| 国产第一页浮力影院| 色情a片做爰片| 日韩在线视频| 韩国毛片| 在线观看电影| 又粗又硬又黄a级毛片| japan高清日本乱xxxxx| 高清家庭影院| 国产欧美日韩一区二区加勒比| 锕锕锕锕锕锕锕锕再深一点| 被H系统改造成校花被H| 亚洲中文字幕无码爆乳av| 国产猛男GAY1069视频 | 公与淑婷厨房猛烈进出| 无码人妻精品中文字幕| 性少妇JEALOUSVUE片|