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細胞培養(yǎng)常見問題及其解決方法
  • 發(fā)布日期:2021-01-12      瀏覽次數(shù):1284
    • 1.如何正確地保存培養(yǎng)基?
      普通的培養(yǎng)基放置在2-8℃冰箱避光保存,若已開封建議3周內使用。未開封的培養(yǎng)基,一般可穩(wěn)定保存1年。

      2.培養(yǎng)基中酚紅的作用是什么?導致培養(yǎng)基顏色變化的原因有哪些?
      酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。
      培養(yǎng)基顏色變黃,原因有:培養(yǎng)基中細胞代謝產物為酸性,培養(yǎng)瓶受污染,細菌代謝產酸等導致。
      培養(yǎng)基顏色偏暗紅色,原因有:培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中,培養(yǎng)基內的二氧化碳逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性,而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑酚紅會隨著堿性增加而更偏暗紅。

      3.培養(yǎng)基污染了,這要怎么進行測試呢?
      取0.1ml液體培養(yǎng)基涂布到無菌蛋白棟牛肉gao培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24h,觀察有無雜菌生長(肉眼即可觀察到)。

      4.培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
      一旦培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素,建議避光保存在4℃冰箱且在2周內用完。因為一些抗生素和血清的基本成分在解凍后就開始降解了。

      5.培養(yǎng)基有沉淀,是怎么回事?怎么預防處理沉淀?
      首先判斷培養(yǎng)基是否已經污染,其次,若沉淀為絮狀沉淀則可能是加入血清引起的,此沉淀對細胞培養(yǎng)無影響。若沉淀為結晶,有可能是因為向培養(yǎng)基里加入的輔助試劑降低了培養(yǎng)基的溶解度,使一些無機鹽析出。
      可應用離心、過濾的方法去除這些沉淀,盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

      6.在什么情況下可以使用不加酚紅的培養(yǎng)基呢?
      研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素(特別是雌激素)的作用。為避免固醇類反應,培養(yǎng)細胞時,用不加酚紅的培養(yǎng)基;一些研究人員在做流式細胞檢測時,為了避免酚紅干擾檢測,也使用不加酚紅的培養(yǎng)基。

      7.為什么培養(yǎng)基中會含有L-谷氨酰胺和丙酮酸鈉,它們的作用是什么?
      L-谷氨酰胺脫掉氨基后可作為培養(yǎng)細胞的能量來源參與蛋白質的合成和核酸代謝。丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源。盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
       

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